北京金百特生物技术有限公司

货号	产品名称	规格	价格	优惠价
V017-100	V017 T4 DNA Ligase	100u	150元
V017-500	V017 T4 DNA Ligase	500u	750元

T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表后分离纯化而来的。它催化相邻DNA链的的5’-磷酸末端和3’羟基末端以磷酸二酯键结合反应。该酶催化平滑末端或粘性末端DNA的连接，修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交中的单链中的单链切口。

（1）DNA片段和载体DNA快速连接；
（2）限制酶切片段的克隆；
（3）将DNA片段与linker或Adaptor连接。

浓度： 5U/ml 本产品U的定义同Thermo的，即：100 U = 100 Weiss Unit = 20000 CEU 

 

• One Weiss unit is equivalent to approximately 200 cohesive end ligation units (CEU)*

1 Weiss Unit = 200 CEU

* One CEU is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16^oC.

一、连接反应体系：(插入片段：载体的摩尔比 =3:1) 

	标准反应管	阳性对照管
Vector	10-50 ng	10-50 ng
PCR产物	n   ml **	/
对照插入DNA片段	/	1ml
T4 DNA连接酶(5U/ml)	2～5U	2～5U
10×Ligation   Buffer	1ml	1ml
加去离子水至终体积	10ml	10ml

一般最后加入T4 DNA Ligase

二、反应循环的设置（一般可在PCR仪器完成）：

粘端连接：22^oC反应10分钟（10ml体系连接酶量为5 Weiss Units，长片段连接可以延长至30分钟）；也可以16^oC反应1-5小时。

平端连接：22^oC反应2小时或16 ^oC过夜。