货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 优惠价 |
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P013-500 | P013 Pfu DNA Polymerase(含超纯dNTP) | 500u | 260元 | 208元 |
P013-3000 | P013 Pfu DNA Polymerase(含超纯dNTP) | 3000u | 1200元 | 960元 |
Pfu DNA Polymerase 是从克隆有DNA Polymerase 基因的大肠杆菌中分离纯化的, Pfu DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性,能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。其PCR产物为平端,可直接用平端载体克隆(Cat#V116、V117)。
用于DNA的高保真扩增,如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析(SNP)和平末端补平等。
注意事项:
1. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性,所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低,应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间,如果扩增片段小于4 kb,建议Pfu酶的延伸速度为1kb / min;如果扩增片段大于4 kb,建议延伸速度为0.5kb / min。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物, 所以应先加dNTP后,再加Pfu酶到反应体系中,并立即进行PCR反应。
2. 用Pfu酶扩增时,引物的纯度要求较高,引物长度大于18个碱基,Tm在55-80℃ 之间,引物浓度在0.1-0.5 μM之间,比Taq酶略高。
3. Pfu酶的热稳定性比Taq酶好,对于GC含量很高的模板,变性温度可以提高到98℃,对Pfu酶的活性无影响。
4. 高保真PFU对于dNTP纯度要求很高,因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。
SDS-PAGE 检测纯度大于99%,经检测无外源核酸酶活性;PCR方法检测无宿主残余DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;室温存放一周,无明显活性改变。