北京金百特生物技术有限公司

货号	产品名称	规格	价格	优惠价
V111-20	V111 One Step Seamless Cloning Kit (单片段)★★★	20次	450元	360元
V111-50	V111 One Step Seamless Cloning Kit (单片段)★★★	50次	850元	680元
V111-100	V111 One Step Seamless Cloning Kit (单片段)★★★	100次	1500元	1200元

One Step Seamless Cloning Kit（单片段）是基于Gibson原理的无缝克隆技术，可简单、快速、高效的将目的片段定向克隆至载体的特定位点。

仅需设计15-25bp同源臂，15分钟可以将一个50bp-15kb PCR扩增片段（平/A末端）克隆插入任意载体的任意位置，形成长度达35kb的重组质粒。一管式mix，兼容高低片段投入量(0.003-0.25pmol)、高低GC同源臂、纯度差/未纯化样本等。

载体、片段使用量计算：

最适克隆载体使用量 = [0.02 × 克隆载体碱基对数] ng ( 0.03 pmol )

最适插入片段使用量 = [0.04 × 插入片段碱基对数] ng ( 0.06 pmol ) 

若插入片段≤200 bp，最适插入片段使用量 = [0.1 × 插入片段碱基对数] ng ( 0.15 pmol )

注意：用纯化后的载体、目的片段去配制克隆体系，克隆效率最高！

也可以直接用酶切原液、PCR原液去配制克隆体系，克隆效率稍低一些，但是在大片段回收效率低的情况下，也是一种很好的解决方案！

举例（直接用 酶切原液、PCR原液 配制连接体系）

①8k载体8ug，用50ul体系酶切，酶切后160 ng/ul，无缝克隆加3 ul载体酶切原液（不做胶回收）；

②PCR扩增35个循环，此时默认PCR原液的浓度是300 ng/ul，目的条带单一的话，不用切胶纯化，无缝克隆加2 ul PCR原液；

③加入5 ul 2x无缝克隆mix，50度抚育30 min。