| 货号 | 产品名称 | 规格 | 价格 | 优惠价 |
|---|---|---|---|---|
| P501-500 | P501 2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix(茎环法) | 500rxn(20μl/rxn) | 1230元 |
2x miRNA Universal SYBR qPCR Mix(茎环法)是专门为茎环法miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式, 配合特殊的Buffer 体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。
预混液中含有通用型ROX,适用于所有qPCR仪,使用qPCR Mix时不需要额外添加ROX来校正仪器。
需要自备的试剂:
待检测miRNA对应的qPCR的引物
茎环法qPCR引物设计
1. Realtime 上游引物设计:
miRNA序列除去3’端6个碱基 的剩余部分作为上游引物,如miR-1的上游引物为(注意 把U改为T):TGGAATGTAAAGAAGT.检查引物的Tm 值(一般参考DNAMAN),如果Tm值较低,则在5’端加GC使Tm值接近60度。因此miR-1的上游引物可设计 为:GCGCTGGAATGTAAAGAAGT,61.4度。
2、下游引物是通用的,序列为GTGCAGGGTCCGAGGT。
引物设计好后,需要通过预试验检测引物的特异性。一般需要做溶解曲线来检测引物的特异性;同时最好将PCR产物进行电泳检测产物是否单一(产物长度很短,需要3%以上的琼脂糖胶)
确保好用!