北京金百特生物技术有限公司

货号	产品名称	规格	价格	优惠价
C015-10	C015 BL21感受态细胞	10×100μL	300元	240元
C015-20	C015 BL21感受态细胞	20×100μL	525元	420元

BL21是最早开发的用于原核表达的菌株，BL21 (DE3)、Rosetta、OrigamiB (DE3)等一系列原核表达菌株均来源于BL21。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达 (如：pET系列)；但含有大肠杆菌RNA聚合酶，可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 (如：pGEX，pMAL质粒)。BL21感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。

DH5α菌株的基因型为：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)。

使用方法：

1.  感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，加入目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25 min。

注意：所使用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的1/10，100 μL感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和。

2.  42℃水浴热激45 sec，迅速放回冰中并静置2 min，晃动会降低转化效率。

3.  向离心管中加入700 μL不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，37℃，200 rpm复苏60 min。

4.  5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取100 μl左右上清，轻轻吹打重悬菌块，并涂布到含相应抗生素的2YT或 LB培养基上。

5.  将平板将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37 ℃ 培养12-16 小时。（如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少15 h。）

蛋白小量诱导表达Protocol：

1.  小摇接菌：在透气试管或透气离心管中准备1-3 mL含相应抗生素的液体LB（或2YT、TB、SOB等 营养丰富培养基），接入一个含有目的质粒的新鲜单菌落。以质粒pet32a为例：在TB营养液中过夜培养的菌体浓度约为LB的3-5倍，SOB的2-3倍。 

2.  37℃，200 rpm 过夜摇菌约10-15h。 

3.  大摇接菌：将第一步的小摇菌液按1-2%比例接菌到50 mL 含相应抗生素的LB（或2YT、TB、SOB 等营养丰富培养基），为增加溶氧，最好使用500 mL 三角瓶（加入营养液的体积一般为三角瓶标定 体积的1/10，最高不超过1/5）。 

4.  37℃，150 rpm 摇菌到OD600值为0.5-0.8（一般需要2-4h）。 

5.  空白对照取样（可选步骤）：在加入诱导剂IPTG前可取样1 mL菌液到1.5 mL 离心管中，12000 rpm离心10 min，弃上清，沉淀放-20℃保存待用。 

6.  第四步的三角瓶中加入IPTG至终浓度为1mM（IPTG浓度可自由调整，1MIPTG溶液货号：SL3861）， 继续37℃，120rpm摇菌2-4h。 

7.  不同时间点取样（可选步骤）：最佳摇菌时间与所表达蛋白有关，表达蛋白不同最佳摇菌时间不同， 为找到最佳诱导时间可在不同诱导时间点取样（例：在诱导第2h，4h，6h，8h，14h取样，离心 后放-20℃保存）。 

8.  离心收菌：三角瓶从摇床拿出，埋入冰中10 min， 4℃，5000g，10 min离心，弃上清，沉淀保存在-20℃。 

9.  待所有样品准备妥当，可以做SDS-PAGE分析蛋白表达。