提取果实种子的总RNA不推荐Trizol?
发布时间：2020-03-11 浏览次数：次
成熟种子RNA的提取为什么那么难？
难在哪呢？
难在种子中富含淀粉，也就是大家常说的“多糖”。
而多糖的许多理化性质与RNA很相似，很难将它们分开。
Trizol主要成份是异硫氰酸胍和苯酚，没有特殊去除多糖和多酚的试剂，沉淀RNA时，也往往伴随着RNA产生多糖的凝胶状沉淀——这种沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液（RNA与多糖混合物），严重影响下游实验的进行。另外多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA无法用于进一步的分子生物学研究。
所以trizol不适合提取种子。
果实RNA的提取为什么那么难呢？
难在果实中富含多酚。
果实经过前期的破碎处理后，酚类物质会释放出来，氧化后处理液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应(browning effect)。被氧化的酚类化合物(如醌类)能与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失，而在用Trizol、氯仿抽提时，RNA还会丢失或形成不溶性复合物，从而影响RNA的分离纯化。
所以trizol也不适合提取果实。
有什么好的办法吗？
在常规的方法中，通过SDS-盐酸胍处理可以部分去除一些多糖；在高浓度Na+或K+离子存在条件下，通过苯酚、氯仿抽提也可以除去一些多糖；此外还可以通过LiCl沉淀RNA将部分多糖留在上清液中。但即使通过这些步骤仍会发现有相当多的多糖与RNA混杂在一起，所以还需要用更有效的方法来解决植物RNA分离纯化时多糖污染的问题。
有些公司尝试在Trizol中添加了如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)或半胱氨酸之类的防止酚氧化的试剂也很难提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是盐酸胍或则异硫氰酸胍，有些公司进行改进之后添加了诸如PVP40等结合多酚的试剂，亦无法取得让人满意的结果。
北京金百特生物技术有限公司在RNA提取方面经过长期的探索，经过5年的实践验证，郑重向您推荐：果实种子总RNA快速提取试剂盒（带gDNA过滤器）—Cat#R513-50，使客户几乎不需要再查资料，不需要花时间和精力去寻找提取合适的试剂盒!在上万例多糖多酚果实种子中，无一例外地提取出来高质量的RNA，其中包括苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、番茄果实、茄子菠萝蜜、玉米种子、小麦种子、大豆种子、苜蓿种子、拟南芥种子......
葡萄果实总RNA——中农食品学院 玉米种子总RNA——农科院作物所
难在哪呢？
难在种子中富含淀粉，也就是大家常说的“多糖”。
而多糖的许多理化性质与RNA很相似，很难将它们分开。
Trizol主要成份是异硫氰酸胍和苯酚，没有特殊去除多糖和多酚的试剂，沉淀RNA时，也往往伴随着RNA产生多糖的凝胶状沉淀——这种沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液（RNA与多糖混合物），严重影响下游实验的进行。另外多糖可以抑制许多酶的活性，因此污染了多糖的RNA无法用于进一步的分子生物学研究。
所以trizol不适合提取种子。
果实RNA的提取为什么那么难呢？
难在果实中富含多酚。
果实经过前期的破碎处理后，酚类物质会释放出来，氧化后处理液变为褐色，并随氧化程度的增加而加深，这一现象被称为褐化效应(browning effect)。被氧化的酚类化合物(如醌类)能与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失，而在用Trizol、氯仿抽提时，RNA还会丢失或形成不溶性复合物，从而影响RNA的分离纯化。
所以trizol也不适合提取果实。
有什么好的办法吗？
在常规的方法中，通过SDS-盐酸胍处理可以部分去除一些多糖；在高浓度Na+或K+离子存在条件下，通过苯酚、氯仿抽提也可以除去一些多糖；此外还可以通过LiCl沉淀RNA将部分多糖留在上清液中。但即使通过这些步骤仍会发现有相当多的多糖与RNA混杂在一起，所以还需要用更有效的方法来解决植物RNA分离纯化时多糖污染的问题。
有些公司尝试在Trizol中添加了如2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)或半胱氨酸之类的防止酚氧化的试剂也很难提取。RNeasy Plant Mini Kit主要裂解液是盐酸胍或则异硫氰酸胍，有些公司进行改进之后添加了诸如PVP40等结合多酚的试剂，亦无法取得让人满意的结果。
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