判断RNA质量好坏的金标准是什么？你知道吗？
发布时间：2022-03-19 浏览次数：次
通常来说，有了好的RNA，qPCR的曲线一般不会太差！
于是，他马上给我发过来一张图
数据是真漂亮！（是谁也得这么说。不接受反驳）
我问他有没有RNA电泳图？
他反而理直气壮地：我们实验室从来不跑电泳图，只要OD值正常，就接着往下做啦。跑电泳多麻烦啊！
在我的再三建议下，他跑了电泳，下面是对应的电泳图:
RNA完全降解！（估计就是神仙来了，也跑不出荧光曲线）
这是没弄清楚判断RNA质量的金标准呀！（也许是被传销公司给洗脑了。）
其实，判断RNA质量的金标准只有两条：
一、琼脂糖凝胶电泳（检测RNA的完整性）
这个真的真的很重要！好比，你在网上认识了一位的美女，一见倾心，很快，约线下见面，发现美女是坐着轮椅来的，就问你，什么感受？！
理论上28S:18S为2.7:1，但长期以来人们使用2:1的比例作为鉴定RNA 完整性的标准。事实上，大多数样品提取的RNA几乎都达不到2：1的比值。如果2 kb处的28S和0.9 kb处的18S条带清晰，且28S：18S>1，该完整性就可以满足绝大部分实验的要求了。
另外，从电泳图还可以看出：RNA是否降解及降解的程度，是否残留基因组DNA的污染（表现为10kb左右的亮带，带的深浅表明DNA污染的严重程度），是否有蛋白污染（点样孔是否发白）。
二、紫外分光光度计（检测RNA的纯度、浓度）
对于RNA的纯度，大家有个共识：260/280=1.8~2.2，RNA的纯度较好；
260/280<1.8，存在蛋白污染；
260/280>2.2，可能存在RNA降解。
260/230的比值，跳跃性比较大，一般不做参考。260/230的比值低并不影响下游实验，我们大量客户的实验也证实了这点，并且Qiagen于2010年也做过类似的分析
结论：260/230的比值低并不影响下游实验。所以260/230比值的高低就没有意义。
2、对于判定RNA的浓度，仪器会自动显示，算法如下：RNA样品浓度（ng/μL）=OD260×稀释倍数×40 ng/μl
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